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细胞培养中常用溶液配制(PBS、DMEM、谷氨酰胺、G418等)
2011-10-22 12:25
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PBS

NaCl 8 g
KCl 0.2 g
KH2PO4 0.2 g
Na2HPO4·12H2O 3.634g
加dH2O至900ml,调pH至7.4,补水至1L,分装到5个蓝盖瓶,灭菌。

TP+EDTA混合液

称取TP 0.25g,EDTA 0.02g,溶于200ml PBS中,过滤除菌。

DMEM与RPMI 1640
前者称取NaHCO3 3.7g,后者称取2.0g。
调pH至7.2~7.4。

谷氨酰胺的配制
称取Gln 2.922g,溶于三蒸水,加至100ml,即配成200 mM的储液。充分搅拌溶解,过滤除菌,分装到2ml EP管中,-20℃保存。使用时可向100ml培养液中加入1ml Gln储液。
由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4℃下放置1周可分解50%,加有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时,应重新加入原来的谷氨酰胺。

G418储液(0.1 mg / uL)
100ml 培养基中加入储液400uL,则筛选浓度为400 ug/ml。
100ml培养基中加入储液200 uL,则维持浓度为200 ug/ml。

LB液体培养基
胰化蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
NaCl 10g
dH2O 1L
用5M的NaOH约0.2 ml调pH至7.0。灭菌20min。
LB固体培养基,另加琼脂12~15g。
LB中氨苄的添加
称取5g氨苄,加水定容至50ml,充分溶解,得到的储液浓度为100mg/ml。过滤除菌,分装到EP管中,-20℃保存。
欲使其工作浓度为100ug/ml,则需稀释1000倍。
即加1ml到1000ml培养基中。或加100ul到100ml培养基中。

 
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